Resumen
Dolosigranulum pigrum es un coco gram positivo, anaerobio facultativo, que forma parte de la microbiota oral y del tracto respiratorio superior. Aunque los reportes de infecciones por este microorganismo son escasos, se lo ha asociado a un amplio espectro de enfermedades infecciosas. Se describe el caso de un hombre adulto con un absceso corneal del que se aisló D. pigrum. El microorganismo fue identificado por espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) y secuenciación del gen 16S ARNr. A su vez, se logró la identificación presuntiva mediante pruebas fenotípicas claves, como la disposición en racimos en la coloración de Gram, la prueba negativa de la catalasa, la producción de pirrolidonil arilamidasa y leucina aminopeptidasa, el crecimiento en NaCl al 6,5% y la hidrólisis de esculina. Los datos de la literatura y el presente caso respaldan la asociación del microorganismo con infecciones oculares, a menudo de curso destructivo, principalmente en pacientes de edad avanzada.
Introducción
El género Dolosigranulum está constituido por cocos gram positivos, anaerobios facultativos, catalasa negativa, que se disponen en pares, tétradas y racimos. Taxonómicamente, se ubica dentro de la familia Carnobacteriaceae y, hasta el momento, Dolosigranulum pigrum es la única especie del género2.
Dolosigranulum fue descrito por primera vez en 1993 por Aguirre et al.1 en muestras de tejido de médula espinal y de hisopado ocular. En dicho estudio se realizó el análisis comparativo de secuencias del gen 16S del ARNr de los aislamientos de ambos sitios. Los resultados demostraron que esta bacteria, hasta el momento desconocida, tenía características fenotípicas comunes con Gemella, pero difería de esta en la composición de su pared celular1. El género exhibió el mayor porcentaje de similitud de secuencia del gen 16S del ARNr con Aerococcus y Globicatella, aunque fue genealógicamente diferente a ambos. A partir de la evidencia filogenética y las diferencias fenotípicas, se propuso la clasificación de estos dos aislamientos clínicos en un nuevo género denominado Dolosigranulum1.
- pigrumforma parte de la microbiota de la cavidad oral y del tracto respiratorio superior2, 8. Este microorganismo ha emergido como un potencial patógeno oportunista en humanos y, aunque son escasas las publicaciones y su incidencia es desconocida, ha sido reportado en un amplio espectro de enfermedades infecciosas, incluyendo neumonía nosocomial, septicemia, neumonía asociada a respirador5, colecistitis aguda, sinovitis, pancreatitis y artritis asociada a biomaterial4, 7. Se ha identificado también en infecciones oculares en casos de córnea neurotrópica, blefaritis, queratitis y conjuntivitis9, 12, 13. Presentamos un caso clínico de un absceso corneal por D.pigrum con el fin de ampliar la información acerca del rol de este microorganismo como agente causal de procesos infecciosos. El presente estudio fue aprobado por el comité de ética del Hospital de Clínicas José de San Martín.
Un hombre de 70 años inmunocompetente, hipertenso, concurrió al Servicio de Oftalmología del Hospital por retracción de párpado superior derecho. Como antecedentes, refería dos cirugías en otro centro oftalmológico por tumoración en ojo derecho. Al momento de la consulta presentaba un ectropión cicatricial y exposición córneo-conjuntival con lagoftalmos (imposibilidad de lograr el cierre completo de los párpados), razón por la cual sufría una queratitis por exposición. Se realizaron dos aplicaciones de ácido hialurónico, que no produjeron mejoría del cuadro, por lo que se programó una tarsorrafia (proceso que consiste en reducir la apertura de los párpados suturando temporalmente sus bordes). Antes de dicha práctica el paciente sufrió un accidente de tránsito, con lesiones que agravaron el lagoftalmos y ocasionaron retracción de ambos párpados por herida en la mejilla derecha. Tres meses después de la cirugía regresó al hospital y se constató la presencia de un absceso corneal inferior en el ojo derecho. Se tomó material para cultivo por raspado corneal, que fue remitido al Laboratorio de Bacteriología. Posteriormente se inició tratamiento empírico con colirios de cefalexina cada 12 horas, vancomicina cada 4 horas y eritromicina cada 6 horas por 7 días, con muy buena evolución. En la coloración de Gram no se observaron bacterias. Se cultivó en agar sangre y en agar chocolate a 37 °C en atmósfera con 5% de CO2. A las 24 horas de incubación desarrollaron colonias puntiformes de diferente tamaño, lo que sugería un cultivo mixto. A las 48 horas se observaron colonias de aspecto homogéneo, alfa-hemolíticas, grisáceas, que se asemejaban a colonias de estreptococos del grupo viridans. La morfología en medio líquido mostró cocos gram positivos dispuestos en tétradas y grupos. La identificación como Dolosigranulum pigrum fue realizada por espectrometría de masas MALDI-TOF MS (BrukerDaltonik®, Bremen, Alemania), con un score de 2,172. Ningún otro microorganismo fue aislado en forma concomitante. La confirmación de la identificación fenotípica del aislado se realizó por amplificación y posterior secuenciación del gen 16S del ARNr utilizando los primers descriptos por Weisburg et al.15. Los productos de PCR fueron secuenciados utilizando el equipo Big Dye Terminator v3.1 Cycle sequencing kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) y analizados en el secuenciador ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (PE Applied Biosystems). El alineamiento de las secuencias se realizó con el algoritmo BLASTN (versión 2.0; National Center for Biotechnology Information) y se compararon con secuencias de cepas de referencia disponibles en la base de datos del GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/). La secuencia obtenida presentó un 99,71% de similitud con la secuencia de la cepa tipo D. pigrum ATCC 51524 y fue depositada en la base de datos de GenBank bajo el número de acceso MT396713.1. El microorganismo también se identificó por la metodología convencional2. Las pruebas bioquímicas de primera línea revelaron la presencia de un microorganismo catalasa negativa, sensible a la vancomicina, con actividad de leucina aminopeptidasa y de pirrolidonil arilamidasa.
En cuanto al crecimiento en caldo con cloruro de sodio (NaCl), una prueba de primera línea2, el microorganismo creció pobremente en caldo tripticasa soya con 6,5% de NaCl, pero mostró buen crecimiento en caldo NaCl de Facklam (caldo tripticasa soya con 6% de NaCl, 0,5% de glucosa y púrpura de bromocresol como indicador). D. pigrum exige su diferenciación de otros géneros y especies de cocos que también se agrupan y son catalasa negativa, como Gemella, Alloiococcus, Facklamia languida, Helcococcus kunzii y Aerococcus spp. Las pruebas diferenciales se muestran en la tabla 1.
Karina L. Roitman a, Marisa N. Almuzara b,c, Mario Javier Fernández
Rodríguez a, Federico Basbus d, Lucía Cipolla e, Claudia M. Barberis b,c
y Carlos A. Vay b,c
a Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI)-Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud (ANLIS) Dr. Carlos G. Malbrán, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina
b Departamento de Bioquímica Clínica, Hospital de Clínicas José de San Martín, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina
c Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica INFIBIOC, Buenos Aires, Argentina
d Departamento de Cirugía, División Oftalmología, Hospital de Clínicas José de San Martín, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina
e Laboratorio de Bacteriología Especial, Departamento de Bacteriología, Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
(INEI)-Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud (ANLIS) Dr. Carlos G. Malbrán, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina
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